MiguelAlfonso

La cromatografía de líquidos es una técnica cuyo objetivo es la separación de los distintos componentes de una mezcla de sustancias, basándose en los diferentes tiempos de retención que experimentan los componentes de la misma al pasar a través de una fase estacionaria, cuando la muestra es eluida por una fase móvil líquida. Así, la separación de los componentes de la muestra se produce debido a sus interacciones entre una fase móvil líquida y una fase estacionaria sólida contenida en una columna cromatográfica.
Una vez separados los componentes de la muestra, es necesario detectar los mismos , y para eso existen distintos sistemas de detección como son la espectrofotometría por ultravioleta (UV), fluorimetría, detección electroquímica, entre otras. La técnica de detección empleada dependerá de las características de las moléculas analizadas, permitiendo un análisis cualitativo (identificación de sustancias) y un análisis cuantitativo (determinación de las cantidades de sustancias).
La técnica cromatográfica empleada para la cuantificación de neurotransmisores es la de detección electroquímica con una fase estacionaria apolar y una fase móvil polar, por lo que las sustancias de la mezcla son retenidas en base a su polaridad, eluyendo antes los componentes polares que los apolares (cromatografía de líquidos en fase inversa).
El equipo cromatográfico está formado por un sistema de bombeo para impulsar la fase móvil, una válvula de inyección para introducir las muestras en el sistema cromatográfico en flujo continuo y a altas presiones, una columna cromatográfica que contiene la fase estacionaria, un detector para determinar las sustancias separadas y un sistema registrador que permite obtener los cromatogramas.
La detección electroquímica está basada en la medida de la corriente resultante de la reacción oxido/reducción de los componentes analizados. El nivel de corriente originada es directamente proporcional a la concentración del componente analizado en cuestión. La característica principal de las sustancias que se quieren analizar mediante la detección electroquímica es su susceptibilidad a la oxidación o reducción (sustancias electroactivas).

Departamento de Bologia Funcional y Ciencias de la Salud.

Area de Fisiologia.

Facultad de Biologia

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